豬胸膜肺炎放線桿菌ApxⅣA抗體檢測試劑盒（酶聯(lián)免疫法）使用說明書

【產(chǎn)品名稱】
通用名：豬胸膜肺炎放線菌ApxⅣA抗體檢測試劑盒（酶聯(lián)免疫法）
英文名：Test Kit for Antibodies to Porcine Actinobacillus Pleuropneumoniae ApxⅣA (ELISA)
豬胸膜肺炎放線桿菌ApxⅣA抗體檢測試劑盒【包裝規(guī)格】 96T×1/盒、96T×2/盒
【預(yù)期用途】 豬傳染性胸膜肺炎是由胸膜肺炎放線桿菌（Actinobacillus Pleuropneumoniae，APP）引起的一種高度傳染性呼吸道疾病，以急性出血性纖維素性胸膜肺炎和慢性纖維素性壞死性胸膜肺炎為特征。APPzui主要的毒力因子為Apx毒素，其中ApxⅣA毒素在所有血清型中都存在。
    本試劑盒檢測豬血清、血漿樣品中ApxⅣ抗體，可用于胸膜肺炎放線桿菌感染的診斷。
【原    理】
    本試劑盒系由預(yù)包被胸膜肺炎放線桿菌（APP）抗原的酶標(biāo)板、酶標(biāo)記物及其他配套試劑組成，應(yīng)用酶聯(lián)免疫法（ELISA）原理檢測豬血清、血漿樣品中胸膜肺炎放線桿菌ApxⅣA抗體。實(shí)驗(yàn)時(shí)在酶標(biāo)板孔中加入待檢樣品，經(jīng)溫育后若樣品中含有胸膜肺炎放線桿菌ApxⅣA抗體，則與酶標(biāo)板上抗原結(jié)合；經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的其他成分后加入酶標(biāo)記物，與酶標(biāo)板上抗原抗體復(fù)合物發(fā)生特異性結(jié)合；再經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的酶標(biāo)記物，加入底物液A、B，與酶反應(yīng)形成藍(lán)色產(chǎn)物，顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成正相關(guān)；加入終止液終止反應(yīng)后產(chǎn)物變?yōu)?；用酶?biāo)儀在450nm波長測定各反應(yīng)孔中的吸光值，即可知樣品是否含有胸膜肺炎放線桿菌ApxⅣA抗體。
【試劑盒組成】 

【儲(chǔ)存及有效期】 于2～8℃避光保存，有效期為12個(gè)月。
包被板開封后請于2～8℃避光保存，避免受潮。使用期限為2個(gè)月。
【適用儀器】 含450nm、630nm波長的酶標(biāo)儀，37℃恒溫設(shè)備，可調(diào)微量移液器。
【樣品準(zhǔn)備】
1.取動(dòng)物全血按常規(guī)方法制備血清，要求血清清亮，無溶血、無污染。樣品1周內(nèi)可于2～8℃保存，長期需置-20℃保存。
2.用樣品稀釋液將待檢血清按40倍稀釋（如5μl血清加入195μl樣品稀釋液中，混勻）。陽性對照按10倍稀釋，陰性對照不用稀釋。
3.濃縮洗滌液使用前應(yīng)恢復(fù)至室溫使沉淀溶解，然后用蒸餾水或去離子水作20倍稀釋。
【檢驗(yàn)方法】
1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘，恢復(fù)至室溫。
2.取所需用量酶標(biāo)板條，設(shè)空白對照1孔、陰性/陽性對照各2孔，未用的板條盡快密封，2～8℃保存。
3.空白對照孔加樣品稀釋液100μl；陰性對照孔加入陰性對照100μl；陽性對照孔加入稀釋好的陽性對照100μl；樣品孔每孔加入稀釋后的樣品100μl。
4.混勻，置37℃反應(yīng)30分鐘。
5.扣去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，重復(fù)洗滌5次，拍干。
6.每孔加酶標(biāo)記物100μl（空白孔除外）。置37℃反應(yīng)30分鐘。
7.洗滌，同步驟5。
8.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl，混勻，37℃避光反應(yīng)10分鐘。
9.每孔加終止液50μl，混勻，用空白孔調(diào)零，于450nm(可用630nm作參比波長）測定各孔吸光值（A值）。
【參考值】 實(shí)驗(yàn)正常的情況下，陰性對照≤0.15，陽性對照≥0.4。
【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】
豬血清樣品中胸膜肺炎放線桿菌ApxⅣA抗體的有(陽性)無(陰性)通過計(jì)算樣品與陽性對照吸光度的比值（S/P值）來判定。
1.S/P=樣品A值/陽性對照比值。
2.S/P≥1為ApxⅣA抗體陽性；S/P＜1為ApxⅣA抗體陰性。
【試驗(yàn)方法的局限性】
    該試驗(yàn)僅作為定性檢測豬胸膜肺炎放線桿菌ApxⅣA抗體。
【注意事項(xiàng)】
1.實(shí)驗(yàn)操作時(shí)需戴手套、穿工作衣，嚴(yán)格健全和執(zhí)行消毒隔離制度，各種實(shí)驗(yàn)廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
2.終止液具有腐蝕性，應(yīng)避免接觸皮膚和衣物，如不慎接觸請立即用大量自來水沖洗。
3.酶標(biāo)板從冷藏環(huán)境中取出時(shí)應(yīng)恢復(fù)至室溫方可開袋，未用完的酶標(biāo)板需放入有干燥劑的密封袋中保存。
4.濃縮洗滌液在低溫時(shí)容易結(jié)晶，使用時(shí)需恢復(fù)至室溫以*溶解。
5.洗滌時(shí)各孔均需加滿液體，防止孔口有游離酶不能洗凈。
6.用于檢測的樣品應(yīng)保持新鮮。
7.試驗(yàn)結(jié)果的判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。
8.不同批號試劑組分不得混用。