將目標抗體包被于96孔微孔板中，制成固相載體，向微孔中分別加入標準品或標本，其中的目標連接于固相載體上的抗體結合，然后加入微生物化的目標抗體，將未結合的生物素抗體洗凈后，加入HRP標記和親和素，再次*洗滌后加入TMB底物顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成終的。顏色的深淺和樣品中的目標呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（O.D.值），計算樣品濃度。
2、靈敏度：檢測濃度?。?/div>
3、特異性：不與其它可溶性結構類似物交叉反應；
4、重復性：板內、板間變異系數(shù)均小于15%；
ELISA試劑盒的選擇方法：
1、特異性：試劑盒的特異性與試劑盒的要害組分，抗體對有關。若抗體對中為多抗，另一個有必要為單抗，建議運用雙單抗。挑選一個好的試劑盒，咱們首先要考慮的就是特異性。
2、靈敏度：試劑盒的好壞往往就取決于靈明度的高低，因而靈敏度也是咱們挑選試劑盒的一個重要技術參數(shù)。靈敏度反映的是試劑盒檢出被檢物質的量的才能，用戶可根據(jù)自己樣本中待檢目標的量挑選合適的試劑盒，假如待檢目標量很低，一般的試劑盒不能滿足要求，可挑選高敏的試劑盒。
3、重復性：科學實驗講究重復性，一般試劑盒，其板內和板間變異系數(shù)應該控制在 15% 以內。
